Desarrollo de una vacuna para aves ponedoras, contra el virus de laringotraqueitis infecciosa aviar (ILTV) utilizando el sistema de expresión de baculovirus

RESUMEN DEL PROYECTO
El virus de la laringotraqueitis infecciosa aviar (ILTV) es una infección que afecta principalmente el tracto respiratorio de los pollos, generando una severa pérdida productiva para el sector avícola. Actualmente, en el mercado nacional se cuenta con vacunas importadas cuyo nivel de protección inmunológico es bajo y con riesgo a su reversión. Por esta razón, nuevas estrategias biotecnológicas se están implementando para generar vacunas que permitan incrementar los niveles de protección y reducir brotes de infección.
El objetivo de este proyecto fue desarrollar una vacuna segura y eficaz basada en la glicoproteína J (gpJ) del ILTV utilizando el sistema de baculovirus para su expresión en la envoltura viral. Para ello, se diseñó in silico un constructo que contenía secuencias codificantes de los siguientes genes: péptido señal gp64-DsRed2-gpJ-dominio transmembrana gp64. Este constructo fue sintetizado, clonado y transformado en E. coli DH5α. Luego, mediante transposición el constructo fue insertado en el genoma del baculovirus presente en células de E.coli DH10BacVSV. Posteriormente, el baculovirus expresando la gpJ fue purificado y transfectado en células de insecto Sf9. Para determinar la capacidad del baculovirus recombinante “Ch-Bv-gpJ” de estimular células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) de pollo, éstos fueron expuestos a diferentes multiplicidades de infección (MOI) de “Ch-Bv-gpJ” detectándose la producción de Ch-IL12 e Ch-IFN-γ en el sobrenadante. Luego, se realizaron ensayos de inmunización (vía instilación nasal) y desafío en aves-SPF (1.7 x 10³ TCID₅₀), considerando 4 grupos (inmunización con “Ch-Bv-gpJ” 10⁶ UFP/ave, inmunización con baculovirus no recombinante 10⁷ UFP/ave, control testigo, control-desafío) con 10 aves por cada grupo. A su vez, también se realizó otro ensayo de inmunización y desafío en aves comerciales (10^1.76 DIP₅₀), considerando 5 grupos (inmunización con “Ch-Bv-gpJ”, vacuna comercial 1, vacuna comercial 2, control testigo y control desafío) con 30 aves por cada grupo. Finalmente, se realizó un ensayo piloto en la empresa RIO BRAVO HNOS SAC en aves de postura.
En conclusión, se logró el desarrollo de una vacuna en base a la expresión de la glicoproteína J de ILTV en la envoltura de baculovirus demostrando ser capaz de estimular las células inmunes del ave y su efecto protector en aves SPF y comerciales, reduciendo la carga viral en tráquea y los signos clínicos en aves frente a la exposición con cepas de ILTV de campo. La vacuna demostró ser segura para aves de postura.

RESULTADOS DEL PROYECTO
• Se demostró la activación in vitro de PBMCs de pollo por exposición a baculovirus recombinante “Ch-Bv-gpJ” mediante la detección de la producción de Ch-IL12 (1098 pg/mL a MOI de 0.2 a las 72 horas post-infección) e Ch-IFN-γ (90 pg/mL a MOI 0.05 a las 72 horas post-infección).

• Para aves-SPF vacunadas con una sola dosis de 10⁶ UFP/ave de baculovirus recombinante “Ch-Bv-gpJ”, se logró reducir la morbilidad en un 83%. Además, se redujo la carga viral en tráquea en un 100% al día 8 post-desafío. No se pudo estimar la mortalidad dado que sólo presentaron signos clínicos.

• Para pollos comerciales vacunados con una dosis de 107 UFP/ave de baculovirus recombinante “Ch-Bv-gpJ”, se logró reducir la mortalidad y la morbilidad en un 100% y 38% respectivamente; además, se redujo la carga viral en tráquea y secreción ocular en un 97% y 99% respectivamente al día 14 post-desafío.

• Se logró la aceptación de la vacuna basada en baculovirus recombinante “Ch-Bv-gpJ” en la empresa avícola RIO BRAVO HNOS SAC donde no se detectó algún impacto de la administración de la vacuna en la producción de huevos.

ESTADO
Terminado 30/09/2016