En este estudio, hemos desarrollado un nuevo virus recombinante rHVT-F utilizando como vector el herpesvirus de pavo (HVT, por sus siglas en inglés: Turkey herpesvirus), que expresa la proteína de fusión (F) del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV, por sus siglas en inglés: Newcastle disease virus) del genotipo XII que circula en Perú. Evaluamos la diseminación viral y la eficacia contra el desafío del genotipo XII de NDV en pollos libres de patógenos específicos (SPF, por sus siglas en inglés: specific pathogen-free). El casete de expresión de la proteína F fueinsertada en la región intergénica única larga (UL, por sus siglas en inglés: unique long) UL45–UL46 del genoma HVT mediante la utilización de una tecnología de Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente Interespaciadas (CRISPR, por sus siglas en inglés: clustered regularly interspaced short palindromic repeat) y edición de genes Cas9 (CRISPR)/Cas9 a través de la vía de reparación de unión de extremos no homólogos (NHEJ, por sus siglas en inglés: non-homologous end joining). El virus rHVT-F, expresó la proteína F de forma estable in vitro e in vivo y mostró una cinética de crecimiento similar a la del virus HVT de tipo salvaje (wtHVT, por sus siglas en inglés: wild-type HVT). La expresión de la proteína F del virus rHVT-F se detectó mediante un ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFA, por sus siglas en inglés: indirect immunofluorescence assay), Western blot y un ensayo de citometría de flujo. La presencia de anticuerpos específicos IgY contra NDV fueron detectados en muestras de sueros mediante un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima (ELISA, por sus siglas en inglés: enzyme-linked immunosorbent assay) en pollos SPF vacunados con el virus rHVT-F. En el experimento de desafío, la vacuna rHVT-F mostró protección completa y redujo significativamente la diseminación viral vía oral a los 5 días post-desafío(dpc, por sus siglas en inglés: days post-challenge). En conclusión, este nuevo candidato vacunal rHVT-F es capaz de proteger completamente a pollos SPF contra el NDV genotipo XII.